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技术支持

培养细胞为啥总是一言不合就抱团
发布时间:2019-08-22   点击次数:219次

细胞为啥总是一言不合就抱团生长?!

是细胞污染了还是正常现象?

是消化不好了还是铺板有问题?

抱团细胞越来越多,怎么样才能让细胞分开生长?

请认真阅读以下干货,看看能否帮您答疑解惑!

细胞抱团一定代表细胞状态不好吗?

细胞生长的时候肯定是要相互联系,大部分的细胞都是要成片生长的,应该仔细观察每种细胞的状态,抱团并不一定代表不好:

1,若细胞轮廓清晰,可看清楚一个个的细胞,像葡萄一样,一串串的,就是状态好的,说明细胞在分裂。

2,但大部分细胞抱团绝对不是一件好事!如果轮廓消失,出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差,就是细胞死亡了。葡萄状和抱团,在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片,如下图:

3,细胞抱团是因为细胞污染了吗?一般细胞培养液清亮,就不是污染。如果是污染了的话,你看培养液颜色就能够看出来,很浑浊的那种。


细胞为啥总是喜欢抱团?

1,细胞死亡释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团(消化的过程可能过于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太强或有毒性等)。

2,细胞离心速度过大或时间太长。

3,消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难!

4,状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态)。

5,传代后细胞铺板不均匀。



如何避免细胞抱团?

1,用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。

2,对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能最da限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低,保证细胞的状态能够最you。

3,细胞生长密度不要太高,70%-80%就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现成层生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团的就越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

4,消化过程中最hao不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。



细胞抱团了,要如何处理?

1,如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数的时候要麻烦点了。在消化的时候在细胞由多角形变成圆型之前,就用手轻磕培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落,就可以了!——最hao不要吹打,对细胞性状和生长都不好。

2,如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。

3,如果细胞抱团是肉眼可见的,那就让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,那可能没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。


总结

引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。

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